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Real Time PCR Ｖｅｒ．1.00
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Real-Time PCR法とは・・・ サーマルサイクラーと分光蛍光光度計を一体化した装置を用いて、PCRでの増幅産物の生成過程をリアルタイムでモニタリングし、解析する方法です。 本法は、電気泳動が不要で、かつ増幅が指数関数的に起こる領域でPCR産物量を正確に定量できる利点があります。
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鋳型ＤＮＡ濃度が高い 鋳型ＤＮＡ濃度が低い threshold cycle（Ct 値）
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１．DNA結合色素（SYBR Green Ⅰ）を用いる方法
励起光 励起光
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SYBR GreenⅠはDNAの副溝（minor groove)に結合します。
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FRET（Fluorescence Resonance Energy Transfer)とは・・・．
蛍光共鳴エネルギー移動現象 FRET（Fluorescence Resonance Energy Transfer)とは・・・． 励起された蛍光団 (Donor : D*) は，そのエネルギーを蛍光や熱エネルギーとして放出する． 特定の条件を満たす分子 (Acceptor : A) が存在すると，共鳴による励起エネルギーの移動 (FRET) が起こる．この時，エネルギーを失った Donor は基底状態にもどり，同時にエネルギーを受け取った Acceptor は励起状態となる．FRET は Donor Acceptor 間の距離が1-10 nm という，非常に広い範囲で起こることが知られている． D を励起し，FRET が起こると，励起状態の A を得ることができる．A が蛍光物質である場合，D を励起すると，（FRETが起こり）A が励起されるため，A からの蛍光を得ることが可能である．
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FRET がおこるために必要な条件 1.Donor の蛍光スペクトルと Acceptor の蛍光スペクトルの重なりがあること
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2.ハイブリダイゼーションプローブを用いる方法
Ｄ Ｄ：ドナー色素 Ａ Ａ：アクセプター色素 発光 オリゴヌクレオチドプローブ 励起光 Ｄ Ａ
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3．TaqManプローブを用いる方法
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参考文献 励起光 励起光 羊土社 ここまでできるＰＣＲ最新活用マニュアル
羊土社 ここまでできるＰＣＲ最新活用マニュアル タカラバイオ株式会社
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