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出力チーム
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BBa_F2620 pTetLuxRpLux Vector 側 LacZ Luciferase Venus YFP PCR でつくります XbaISpeIPstI
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レポーター遺伝子の現状 LacZ – BBa_J33202(miniprep 済み ) Luciferase – Renilla Luciferase BBa_J52008 (miniprep 済み ) – Firefly Luciferase BBa_I712019(transformation×) Venus YFP – BBa_E2030 (transformation×) – Craig からの Venus YFP(miniprep 済み )
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GFP との比較 ( 現在実験中 ) Induction から出力までの時間の比較を比較 します。
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問題点 Luciferase – Luciferin の膜透過性について pH を下げる (pH4.5 程度 ) や EDTA で処理することで膜 透過性が上がるという報告があります。 セレンテラジン (Renilla Luciferase の基質 ) の場合多少 の膜透過性があり、発光実験がなされているよう です。 Venus YFP – Venus YFP のなかに PstI サイトがあるため、 ソーイング PCR で制限酵素サイトを消します
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Lux オペロン (LuxCDABE) Vibrio fischeri 由来 – ルシフェリン合成 (LuxCD-E) と、ルシフェラー ゼ（ LuxAB) の発現をして発光するためのオペ ロン ルシフェリンが膜透過できなかった時の ために準備 – 全長 6kBp 程度のため PCR ができるか
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GFP との比較 出力までの時間の比較 – 出力が GFP となっているプラスミドと比較し ます（ BBa_T9002 と比較します） – AHL を添加する時間を合わせて出力が GFP のも のと比較しようと考えています。 LacZ, Luciferase, Venus YFP との比較をしま す 現在、 GFP と Venus YFP の蛍光を発するまで の時間を比較しています。
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Luciferin セレンテラジンホタルルシフェリン
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