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きのこ種菌の純粋分離 ①培地作成 ・基礎培地 →「Potato Dextrose Agar」 ⇒PDA (ジャガイモ寒天培地)

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1 きのこ種菌の純粋分離 ①培地作成 ・基礎培地 →「Potato Dextrose Agar」 ⇒PDA (ジャガイモ寒天培地)
             (ジャガイモ寒天培地)     ※オートクレーブ(120℃・15分)で滅菌  ・添加物 →  ペニシリン           ストレプトマイシン     ※抗生物質は熱変性するので,      ろ過滅菌して添加する。

2 「選択培地」を作り,そこにサンプルごと投入
②集積培養   「選択培地」を作り,そこにサンプルごと投入 栄養成分を制限し,培養する菌を限定する                (生存できる菌) 【方法】 1.キノコをメスで切り,内部を切り出す 外気に触れていないので,雑菌に汚染されていない。 ※写真では,滅菌したカミソリを使用

3 2.内部の小片(3~4mm)を取り出す ※写真では,滅菌したつまようじを使用

4 3.小片を培地中央に静置する ※写真では,滅菌したつまようじを使用 4.インキュベータ内で培養する

5 この中から,目的とする菌だけを取り出さなければいけない。
③純粋分離法   集積培養の結果,目的とする菌とともに,   雑菌も存在する場合がある。 この中から,目的とする菌だけを取り出さなければいけない。 目的とする菌だけが増殖した場合。 目的とする菌とともに,雑菌も増殖した場合。 培養5日目(しいたけ)

6 目的とする菌だけが増殖した場合 最もきれいな場所を白金耳で取り,新しい培地に波状に塗抹する。 培地の面積を有効に使う

7 最もきれいな3箇所からそれぞれ白金耳で取り,新しい培地に直線状に塗抹する。
雑菌も増殖した場合 白金耳はその都度殺菌すること!

8 斜面培地⇒好気性菌の保存 高層培地⇒嫌気性菌の保存 ④保存 冷蔵庫(約5℃)で保存し, 継代培養を行う。 斜面培地への保存の様子
きのこ種菌は   こちらです。 斜面培地⇒好気性菌の保存 高層培地⇒嫌気性菌の保存 冷蔵庫(約5℃)で保存し, 継代培養を行う。 斜面培地への保存の様子

9 純粋分離・培養を雑菌が混入しなくなるまで繰り返す。
種菌として   保存する 保存 純粋分離・培養


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