血中PCB全異性体分析について 大塚製薬株式会社　大塚ライフサイエンス事業部 EDC分析センター 　　　　　　　　　　　　　　　平井　哲也.

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1 血中PCB全異性体分析について 大塚製薬株式会社　大塚ライフサイエンス事業部 EDC分析センター 　　　　　　　　　　　　　　　平井　哲也

2 内容 ・血中PCB全異性体測定について ・プール血液の分析とデータ解析 ・血液サンプル測定結果と臨床検査 　結果等との関係について

3 PCBをめぐる課題及び状況 早期処理 の必要性 POPs条約 環境汚染 PCB廃棄物の適正な処理の推進に関する
生産・使用等 保管・紛失・放出 国産生産　58,787 t ( ) ・高圧トランス・コンデンサ等 ・熱媒体用　 ・感圧紙・その他　 ・高圧トランス・コンデンサ 保管　220千台　（58％） ・環境への放出 ノンカーボン紙 蛍光灯の安定器 船底塗料　等に使用 約90% 約10% 回収熱分解されたもの 5,500 t (S62~H元年） 鐘淵化学工業 早期処理 の必要性 POPs条約 環境汚染 PCB廃棄物の適正な処理の推進に関する 特別措置法（H 成立）

4 血中PCB測定 ・血中ダイオキシン類測定 ・血中総PCB測定 ・血中PCB全異性体測定 ＴＥＦの定められているDioxin類 29異性体測定
　（PCDDs+PCDFs　17異性体　Co-PCBs　12異性体） ・血中総PCB測定 ・血中PCB全異性体測定　 PCB209種類の全異性体（Co-PCBsを含む）を別に測定 PCBの詳細な解析には Congener Specific な分析法が要求される

5 血中PCB全異性体測定 ・PCB製品（KC300-600等）の使用用途により 特異的な異性体・同族体分布を呈する。
　特異的な異性体・同族体分布を呈する。 　低塩素化物中心：ノンカーボン紙・紙コンデンサー由来（KC300) 　高塩素化物中心：船底由来（KC600) ・PCB全異性体を測定する事により詳細な異性体情報が得られ、 　環境、ヒトにおけるPCBの挙動把握 ・PCB曝露の有無・曝露経路の推定 ・TEFをもたない異性体にダイオキシン毒性とは異なるホルモン 　様作用がある

6 プール血液中のPCB全異性体の分析 ・インフォームドコンセントの得られた健常人 血液（N=10）をプールしPCB全異性体分析
　に用いた。また、プール血液を4つに分け 　測定した繰り返し再現性データを得た。 ・PCB全異性体の組成比・PCB製品との比較を行った。 ・血液試料に特徴的な異性体と生体内代謝 　について解析した。

7 Scheme Outline of clean up method and measuring method
13C12-PCBs Internal standard solution Blood　15 ml 2 M-KOH/Ethanol 10 mL Shaking 120 min Ethanol mL Water* mL n-Hexane 15 mL Extraction with n-Hexane 15 mL under shaking 30 min Hexane phase Water phase Hexane phases (2 times) are set to one Washing up by water* 10 mL(x2) *:Water was washed up by n-Hexane Dehydration by Sodium sulfate anhydrous and concentrate Multilayer silica gel column chromatography 10%DCM / n-Hexane (V/V) 100 mL HRGC/HRMS measure 13C12-PCBs syringe spike solution PCBs are concentrated to 40μL under nitrogen gas in GC vial.

8 The Conditions of Measurement Method for PCBs
Instruments HRGC / HRMS HP6890series (Hewlett Packard) / AutoSpec-Ultima ( micromass ) Analysis conditions Injection　Temp.　290 ℃　　　Flow　1 ml / min. (constant flow) Column HT8-PCB (Kanto Chemical Co., INC.,) 60 m x mm I.D. Oven Temp. mono ~ penta　120 ℃ ； 20 ℃ / min.；180 ℃，0 min.； 　　　　　　　　　2 ℃ / min.；　252 ℃ ； 50 ℃ / min.；310 ℃ ，5 min. hexa ~ deca 120 ℃ ； 20 ℃ / min.；180 ℃，0 min.； 　　　　　　　　　2 ℃ / min.；　260 ℃ ； 5 ℃ / min.；310 ℃ ，5 min. Interface　Temp.　　290 ℃ Source　Temp.　280 ℃　　　Electron Energy 35 eV Resolution 12000

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10 BZ Number （ Ballschmiter K and Zell M , 1980 )

11 血中PCB全異性体測定結果・繰り返し再現性

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15 D2CB #11 KC-300,400,500,600 equivalent mixture Pooled blood sample
Retention Time (min.)

16 T3CB #28 #31 KC-300,400,500,600 equivalent mixture Pooled blood sample
Retention Time (min.)

17 T4CB #74 #80 KC-300,400,500,600 equivalent mixture Pooled blood sample
Retention Time (min.)

18 P5CB #118 #99 #105 KC-300,400,500,600 equivalent mixture
Pooled blood sample #118 #99 #105 Retention Time (min.)

19 H6CB #153 #163 #138 #164 KC-300,400,500,600 equivalent mixture
Pooled blood sample #153 #163 #164 #138 Retention Time (min.)

20 H7CB #180 #182,187 #170 KC-300,400,500,600 equivalent mixture
Pooled blood sample #180 #182,187 #170 Retention Time (min.)

21 O8CB KC-300,400,500,600 equivalent mixture Pooled blood sample #199 #194 #203 #195 #202 #196 Retention Time (min.)

22 N9CB #206 #208 #207 KC-300,400,500,600 equivalent mixture
Pooled blood sample #206 #208 #207 Retention Time (min.)

23 プール血液中で検出した塩素数別異性体数

24 Fig. Homologue distribution of PCBs in Kanechlor and pooled blood
KC-200 KC-500 KC-300 KC-600 KC-400 Pooled blood Fig. Homologue distribution of PCBs in Kanechlor and pooled blood

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28 ＃74

29 #99 #118 #153 #138

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31 PCBの生体内動態 ・脂溶性が高い 体内に取り込まれると ・生物学的に安定 蓄積し排泄が困難
　　の程度には顕著な差がみられる。 2)　動物の種類によっても大きく異なる事が報告されている。 　　・塩素数4個以下の場合、代謝とともに比較的容易に体外 　に排泄される。 ･ヒト、ラット、サルではほとんど代謝されない2,4,5,2’,4’,5’ - 　　　HxCB (#153)が、イヌ，モルモットでは代謝能が高い。

32 ・2,4,5-位塩素置換体 　2,4,4’,5-TeCB（#74）　 　2,2’,4,4’,5-PeCB（#99） 　2,3’,4,4’,5-PeCB（#118）　 　2,2’,3’,4,4’,5-HxCB（#138） 　2,2’,4,4’,5,5’-HxCB（#153）　　2,2’,3,4’,5,5’,6-HpCB（#187） 　血液中の主要なPCB異性体は2,4,5-位が置換（上記）された 　ものが残留している。今回分析したプール血液においても 　＃153が総PCBの19.7 %,　＃138が総PCBの7.9 %を 　占めていた。 ・3,3’-DiCB (#11) 　PCB製品には極微量にしか存在しないが、環境試料中でも 　無視できない場合がある。合成有機顔料、トナーの3,3’- 　ジクロロベンジジン由来との報告がある1)。 　　1)　S.Litten et al, Organohalogen compounds, 46, (2000)

33 健常人血液中のPCB測定結果（主異性体・総濃度）

34 総PCB濃度と年齢の関係

35 総PCB濃度と 　　甲状腺検査の関係

36 総PCB濃度と脂質検査の関係

37 まとめ ・HRGC / HRMSとHT8-PCB カラムを用いて血中PCB全　異性体分析を行い健常人血液中PCB異性体の解析とPCB製品との組成比較等を行った。 ・血液中総PCB濃度と年齢・臨床検査結果との関係についての解析を行った。