アザン染色 （Azan stain） 結合組織の染色

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1 アザン染色 （Azan stain） 結合組織の染色

2 目的 原理 膠原線維と筋線維を染め分ける染色法。 酸性タール色素の重染色（配合染色）
酸性色素の分子量（分散度）の差に基づく方法であり、分子量の小さい色素は密な組織に、分子量の大きい色素は粗な組織に吸着されることを利用している。 膠原線維は粗構造で間隙が広く、筋線維では密構造で間隙が狭い。 負電荷小色素分子のアゾカルミンＧ、オレンジＧは密構造に入りやすく内面を密におおう。 アニリン青は、一部正帯電のNH3基をもち親水性に乏しいので吸着性が大きく、広い間隙に入り小色素分子を押し退けて定着する。 アニリン青＞酸性フクシン＞アゾカルミンＧ＞オレンジG＞ピクリン酸

3 結合組織 膠原線維 細網線維 弾性線維 体の中のいろいろな構造や臓器のすき間を埋めて支える組織。
結合組織は全身のいたるところにあり、細胞への栄養分を補給したり細胞から 老廃物を排除するなど、新陳代謝に関わっている。 膠原線維 細網線維 弾性線維 主に存在する 臓器 靱帯 軟骨 結合組織 リンパ節 脾臓 肝臓 基底膜 動脈 肺 皮下真皮 化学的組成 コラーゲン レチキュリン エラスチン 特性 弾力性 格子状、網目状 伸縮する 広い意味での結合組織には、骨、軟骨、脂肪、腱（筋肉と骨をつなぐ部分）、靱帯（関節をささえる）、真皮（皮膚の一部）、皮下組織、 いろいろな内臓にあるリンパ組織、血液など、一見構造がかなり異なっている、さまざまな種類の組織が含まれる。 コラーゲン蛋白質は引っ張られる力に対して非常に強く、弾力性もあるため、構造が壊れにくくなる働きがある。 煮魚が冷えると、煮こごりができることがある。 これは魚に含まれる膠原線維が分解されて、膠（にかわ）状に なったもので、膠原線維の名前の由来になっている。

4 試薬 媒染液 アゾカルミンＧ液 使用する前に60℃に暖めておく アニリン・アルコール 酢酸アルコール リンタングステン酸液
　　　10%トリクロル酢酸水溶液　　　　　　 　10%重クロム酸カリウム水溶液　　　　 アゾカルミンＧ液 　　　使用する前に60℃に暖めておく アニリン・アルコール 酢酸アルコール リンタングステン酸液 アニリン青オレンジＧ液 リンモリブデン酸

5 アゾカルミン SO3Na SO3Na N N N+ N+ NH NH SO3Na SO3 SO3- アゾカルミンG アゾカルミンB
水にもエタノールにも溶ける。 BはGよりも水に溶けやすく、染色性はGに劣る。 時々ロット差がある。 アゾカルミンG アゾカルミンB

6 オレンジG HO N ＝ N NaO3S SO3Na スルホン基が２つあるため強酸性、水には約１１％溶けるが、エタノールには溶けにくい。
もっとも重要な細胞質染色色素の１つ、赤橙色の色調はおそらく細胞質タンパク中のチロシンおよびトリプトファン残基との結合によるものと考えられている。

7 染色法 脱パラ・流水水洗 アゾカルミンＧ液 軽く水洗（流水×） アニリンアルコール 酢酸アルコール 流水水洗 リンモリブデン酸 流水水洗
アニリン青オレンジＧ液 アルコール×３ キシロール・封入 染色 分別 分別停止 媒染 染色 分別脱水・透徹

8 注意 アゾカルミンＧは十分濃く染色しておく。 アニリン・アルコールによる分別はかなり速く脱色される。
　アゾカルミンＧは十分濃く染色しておく。 　アニリン・アルコールによる分別はかなり速く脱色される。 リンタングステン酸でもある程度脱色されるので、少し濃い程度にしておく。 　アニリン青の分別は非常に大切で、この分別１つでアザン染色の成否が決まるといってよい。できるだけ早く染色液を純エタノールと置換することが大切。 　染色をやり直す時は、薄いアンモニア水か、アンモニアアルコールに入れ脱色し、水洗して染色をやり直す。

9 染色結果 膠原線維 濃青色 細網線維、基底膜 青色 細胞核 赤色

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