きのこ種菌の純粋分離 ①培地作成 ・基礎培地 →「Potato Dextrose Agar」 ⇒PDA （ジャガイモ寒天培地） （ジャガイモ寒天培地） ※オートクレーブ（120℃・15分）で滅菌 ・添加物 → ペニシリン ストレプトマイシン ※抗生物質は熱変性するので， ろ過滅菌して添加する。
「選択培地」を作り，そこにサンプルごと投入 ②集積培養 「選択培地」を作り，そこにサンプルごと投入 栄養成分を制限し，培養する菌を限定する （生存できる菌） 【方法】 １．キノコをメスで切り，内部を切り出す 外気に触れていないので，雑菌に汚染されていない。 ※写真では，滅菌したカミソリを使用
２．内部の小片（３～４ｍｍ）を取り出す ※写真では，滅菌したつまようじを使用
３．小片を培地中央に静置する ※写真では，滅菌したつまようじを使用 ４．インキュベータ内で培養する
この中から，目的とする菌だけを取り出さなければいけない。 ③純粋分離法 集積培養の結果，目的とする菌とともに， 雑菌も存在する場合がある。 この中から，目的とする菌だけを取り出さなければいけない。 目的とする菌だけが増殖した場合。 目的とする菌とともに，雑菌も増殖した場合。 培養５日目（しいたけ）
目的とする菌だけが増殖した場合 最もきれいな場所を白金耳で取り，新しい培地に波状に塗抹する。 培地の面積を有効に使う
最もきれいな３箇所からそれぞれ白金耳で取り，新しい培地に直線状に塗抹する。 雑菌も増殖した場合 白金耳はその都度殺菌すること！
斜面培地⇒好気性菌の保存 高層培地⇒嫌気性菌の保存 ④保存 冷蔵庫（約５℃）で保存し， 継代培養を行う。 斜面培地への保存の様子 きのこ種菌は こちらです。 斜面培地⇒好気性菌の保存 高層培地⇒嫌気性菌の保存 冷蔵庫（約５℃）で保存し， 継代培養を行う。 斜面培地への保存の様子
純粋分離・培養を雑菌が混入しなくなるまで繰り返す。 種菌として 保存する 保存 純粋分離・培養