血液中のPCB全異性体分析 平井 哲也*, 藤峰 慶徳*, 中野 武** *:大塚製薬株式会社 大塚ライフサイエンス事業部 平井 哲也*, 藤峰 慶徳*, 中野 武** *:大塚製薬株式会社 大塚ライフサイエンス事業部 EDC分析センター **:兵庫県立環境健康科学センター
すい事から過去に使用され環境中に放出されたPCBが 食物連鎖を通じてヒトに蓄積されている.毒性としては, はじめに PCBは生物学的に安定かつ生体内の脂肪に蓄積されや すい事から過去に使用され環境中に放出されたPCBが 食物連鎖を通じてヒトに蓄積されている.毒性としては, コプラナーPCBにおいてダイオキシン類としての毒性が ある.しかし,TEFを持たないPCBについてもダイオキシン 類毒性とは異なる内分泌撹乱作用があるとの報告 もある. PCB分析用に開発されたHT8-PCBカラム を用い HRGC/HRMSにてヒト血液中PCB 全異性体分析を行った. インフォームドコンセントの得られた健常人血液 (n=24, 男女各12名,年齢25~46才)を用いて分析を行い, 健常人血液中に検出した異性体の解析と臨床検査との 相関関係について検討を行ったので報告する.
血液からのPCB抽出・クリーンアップ 脂肪抽出 (加算法) Blood 15 ml 2 M-KOH/Ethanol 10 mL 13C12-PCBs Internal standard solution Serum 0.5ml Shaking 120 min Kit Method Ethanol 4 mL Water* 8 mL n-Hexane 15 mL Weigh at lipid Extraction with n-Hexane 15 mL under shaking 30 min Hexane phase Water phase n-Hexane phases (2 times) are set to one Washing up by water* 10 mL(x2) *:Water was washed up by n-Hexane Dehydration by Sodium sulfate anhydrous and concentrate Multilayer silica gel column chromatography 10%DCM / n-Hexane (V/V) 100 mL HRGC/HRMS measure (AutoSpec-Ultima) 13C12-PCBs syringe spike solution PCBs are concentrated to 40μL under nitrogen gas in GC vial.
The Conditions of Measurement Method for PCBs Instruments HRGC / HRMS HP6890series (Hewlett Packard) / AutoSpec-Ultima ( micromass ) Analysis conditions Injection Temp. 290 ℃ Flow 1 ml / min. (constant flow) Column HT8-PCB (Kanto Chemical Co., INC.,) 60 m x 0.25 mm I.D. Oven Temp. mono ~ penta 120 ℃ ; 20 ℃ / min.;180 ℃,0 min.; 2 ℃ / min.; 252 ℃ ; 50 ℃ / min.;310 ℃ ,5 min. hexa ~ deca 120 ℃ ; 20 ℃ / min.;180 ℃,0 min.; 2 ℃ / min.; 260 ℃ ; 5 ℃ / min.;310 ℃ ,5 min. Interface Temp. 290 ℃ Source Temp. 280 ℃ Electron Energy 35 eV Resolution 12000
Monitor Ions of PCB analysis
BZ Number ( Ballschmiter K and Zell M , 1980 ) IUPAC # 107 109 2,3,3',4',5-Penta CB Penta CBs 2,3,3',4,5'-Penta CB 108 107 2,3,3',4,6-Penta CB 109 108 2,2',3,3',4,5,6,6'-Octa CB 199 200 Octa CBs 2,2',3,3',4,5',6,6'-Octa CB 200 201 2,2',3,3',4,5,5',6'-Octa CB 201 199
脂肪重量測定:The adding method(加算法)* TL = 1.69 × (TC - FC) + FC + PL + TG TL : Total lipid TC : Total cholesterol FC : Free cholesterol PL : Phospholipid TG : Triglyceride y = 0.871x + 3.09 R= 0.94 10 20 30 40 n=32 TEQ concentration by the adding method (pgTEQ/g-lipid) TEQ concentration by n-hexane extraction (pgTEQ/g-lipid) 2003年環境化学討論会 望月氏発表データ 脂肪抽出法(暫定マニュアル法(ヘキサン抽出)と加算法(Kit))の違い による血中ダイオキシン類測定値(pg/TEQ/g-lipid)の相関 * : H. Kobayashi, Medical technology, 12(8): 1004~1007, 1980
健常人血液中PCB測定結果(1~5塩素)
健常人血液中PCB測定結果(6~10塩素)
健常人血液中のPCB測定結果(主異性体・総濃度)
健常人PCB血液クロマトグラム(3~7塩素) Tri-CBs #28 #31 Tetra-CBs #74 #80 Penta-CBs #118 #99 Hexa-CBs #153 #163/ #164 #138 Hepta-CBs #180 #182/187 #170 健常人PCB血液クロマトグラム(3~7塩素)
Levels of the predominant PCB congeners in human blood Mean ± 2S.D. Existence Ratio* (BZ#) (ng /g-lipid) (%) #153 28.0 22.3 #180 14.9 16.6 11.8 #138 10.4 9.2 8.3 #182,187 8.5 6.6 #118 6.9 5.9 5.5 #163,164 6.4 6.2 5.1 #99 4.7 4.2 3.8 #74 4.6 2.6 3.6 #146 4.1 3.7 3.3 #170 3.0 #156 2.8 2.3 Sum 75.6 * Mean is compare to total PCBs level
PCB異性体濃度と臨床検査結果との相関係数 臨床検査 : 年齢 ・ 性別 ・ 遊離T3 ・ 遊離T4 ・ TSH ・ 遊離コレステロール ・ 総脂質 ・ リン脂質 ・ 中性脂肪 ・ 総コレステロール
まとめ ・HRGC / HRMSとHT8-PCB カラムを用いてPCB全異 性体分析を行い健常人血液中PCB異性体の解析を 行った. 置換したもの(#153,138,118,180,187,74,99)を高濃度 に検出した. ・血液中総PCB濃度と主異性体について年齢・臨床 検査結果との相関係数について解析した. ① 年齢については解析したすべての異性体で有意 な正の相関関係を認めた. ② TSHについても総PCBと数種異性体において若干 正の相関関係を認めた. ③ 他の臨床検査値とは,特に相関を認めなかった.